Reporte de la presencia de Trypanosoma spp. mediante PCR anidada y ELISA indirecto en el ganado bovino de la parroquia San Pedro de Suma del cantón El Carmen, provincia de Manabí, Ecuador”
Cristina Cholota
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Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE
Armando Reyna
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Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE
María Augusta Chávez
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Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE
Report of the presence of Trypanosoma spp. by nested PCR and indirect ELISA in bovine cattle from San Pedro de Suma parish in canton El Carmen, province of Manabí, Ecuador"
Resumen
La tripanosomosis animal afecta a una gran cantidad de ganado bovino en América Latina, esta enfermedad puede ser causada por Trypanosoma vivax, Trypanosoma evansi y Trypanosoma theileri, cuya sintomatología es responsable de grandes pérdidas económicas. En Ecuador la tripanosomosis ya ha sido reportada en las provincias de Pichincha y Santo Domingo de Tsáchilas, mientras que en Manabí, una de las provincias más importantes dedicadas a la ganadería, aún no se han realizado estudios para determinar la presencia de Trypanosoma spp., es por ello que la investigación realizada en abril 2016 - septiembre 2017, tuvo lugar en San Pedro de Suma, una parroquia rural ubicada en el cantón El Carmen, Manabí, con el fin de diagnosticar la enfermedad en esta zona. Para este fin se recolectaron 264 muestras de sangre bovina con y sin anticoagulante, de estas muestras se extrajo ADN y suero respectivamente. Con las muestras de suero se realizó la prueba de ELISAi y con las muestras de ADN se realizó una PCR anidada que amplifica los espaciadores de transcripción interna (ITS). Además se clonaron y secuenciaron productos de PCR positivos, obteniendo dos secuencias consensos correspondientes a las muestras de ADN: M20, M180, con estas secuencias se realizó el análisis filogenético. Así mismo con la información recolectada en el muestreo mediante registros y encuestas, se analizó algunas variables como factores de riesgo para la enfermedad. La prevalencia de tripanosomosis con la prueba de ELISAi fue de 17.80% y con la PCR anidada fue de 48%. La PCR anidada también permitió identificar T. vivax (1,89 %, 5/264), T. evansi (8,33 %, 22/264) y T. theileri (39.77%, 105/264). Se evidencia una concordancia débil con los resultados del ELISAi y PCR. Se determinó como factor de riesgo el sistema de producción extensivo. El análisis filogenético reveló que las M180 corresponde a T. theileri, mientras que la secuencia M20 no se pudo identificar el organismo a cual corresponde esta secuencia y por lo tanto se recomienda realizar futuros estudios para identificarlo.
Palabras Clave: Trypanosoma, PCR, ELISAi, prevalencia y factor de riesgo
Abstract
Animal trypanosomosis affects a large number of cattle in Latin America, this disease can be caused by Trypanosoma vivax, Trypanosoma evansi and Trypanosoma theileri, whose symptoms are responsible for large economic losses. In Ecuador, trypanosomosis has already been reported in the provinces of Pichincha and Santo Domingo de Tsáchilas, while in Manabí, one of the most important provinces dedicated to livestock, no studies have yet been conducted to determine the presence of Trypanosoma spp., that is why the research carried out in April 2016 - September 2017, took place in San Pedro de Suma, a rural parish located in the canton El Carmen, Manabí, in order to diagnose the disease in this area. To this end, 264 samples of bovine blood were collected with and without anticoagulant, DNA and serum were extracted from these samples, respectively. The ELISAi test was performed with the serum samples and a nested PCR was made with the DNA samples that amplify the internal transcription spacers (ITS). In addition, positive PCR products were cloned and sequenced, obtaining two consensus sequences corresponding to the DNA samples: M20, M180, with these sequences the phylogenetic analysis was performed. On the other hand, with the information collected in the sampling through registers and surveys, some variables were analyzed as risk factors for the disease. The prevalence of trypanosomosis with the ELISAi test was 17.80% and with the nested PCR was 48%. The nested PCR also identified T. vivax (1.89%, 5/264), T. evansi (8.33%, 22/264) and T. theileri (39.77%, 105/264). There is a weak concordance with the ELISAi and PCR results. The extensive production system was determined as a risk factor. The phylogenetic analysis revealed that the M180 corresponds to T. theileri, while the sequence M20 could not identify the organism to which this sequence corresponds and therefore it is recommended to carry out future studies to identify it.
Key Words: Trypanosoma, PCR, iELISA, prevalence and risk factor